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PCR反應鑒定——PCR反應條件:

客戶只需提供樣品和待檢測名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：

(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；

(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。

其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結果。

其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
PCR實驗方法步驟：

方法

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，產(chǎn)品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。

3：結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

以下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

反卷毛殼α2-PI (α2-Plasmin Inhibitor) ELISA Kit拉丁屬名: Chaetomium convolutum

云芝栓孔菌DLAT (Dihydrolipoyl Transacetylase) ELISA Kit 注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

黑木耳云章氏酵母G6PD (Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase) ELISA Kit 拉丁屬名: Yunzhangia auriculariae

芽胞桿菌屬FGFR2 (Fibroblast Growth Factor Receptor 2) ELISA Kit 拉丁屬名: Bacillus sp.

鞘氨桿菌CRT (Calreticulin) ELISA Kit 拉丁屬名: Sphingobacterium  sp.

瘤突曲霉CTR (Calcitonin Receptor) ELISA Kit 拉丁屬名: Aspergillus tuberculatus

卷枝毛霉Lptn/XCL1 (Lymphotactin) ELISA Kit拉丁屬名: Mucor  circinelloides

糞腸球菌PON1 (Paraoxonase 1) ELISA Kit拉丁屬名: faecalis

褐囊蜜環(huán)菌CASP14 (Caspase 14) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蘇云金芽孢桿菌景洪亞種H-Cadherin (Cadherin, Heart) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

蛹蟲草（北冬蟲夏草，北蟲草）KAF (Keratinocyte Autocrine Factor) ELISA Kit拉丁屬名: Cordyceps  militaris

帕氏食氫產(chǎn)水菌 拉丁屬名：Hydrogenophaga palleronii 規(guī)格：凍干物 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株:非模式菌株 主要用途:分類；研究；教學 特征特性:直桿狀，端圓，通常為0.5μm× 1.0～3.0 μm，細胞內(nèi)不含聚β-羥基丁酸鹽，不形成內(nèi)生孢子，革蘭氏陰性。不運動，無滑動或泳動。嚴格好氧。在固體培養(yǎng)基上生長，產(chǎn)生典型的色素(黃色或橙色)，但有些菌株不產(chǎn)色素。菌落半透明(偶爾為不透明)，圓形(直徑1～2 nm)，隆起或微隆起，光滑且有光澤，全緣。

金霉素鏈霉菌 用途：Produces aureomycin (U.S. Pat. 2,482,055), chlortetracycline, tetracycline (U.S. Pat. 3,053,740). 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Streptomyces 種名加詞：aureofaciens

戈盧別夫氏酵母 拉丁屬名：Golubevia pallescens 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

絳紅小單孢菌 拉丁屬名：Micromonospora purpurea 用途：分類；研究； ；分類學研究。產(chǎn)慶大霉素。 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

彭氏變形桿菌 拉丁屬名：Proteus penneri 規(guī)格：凍干粉 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

光黑腹菌 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Rhizopogon 種名加詞：piceus Berk. & M.A. Curtis

大孢硬皮馬勃 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Scleroderma 種名加詞：bovista Fr.

黃孢紫紅菇 用途：屬外生菌根菌 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 拉丁屬名：Russula 種名加詞：turci Bres. 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究；教學 具體用途：屬外生菌根菌 特征特性：子實體較小，菌蓋直徑2.5-7cm，扁半球形或扁平至近平展，中部稍下凹，紫紅色之淡紫色，中部色較深，后期變淡，有時便黃色或淺黃色，蓋表形成微顆?；蛐↓斄眩吘壠交蛏杂袟l紋。菌肉白色。菌褶淺黃白色，直生，厚而脆，不分叉，有橫脈。菌柄長3-5cm，粗0.8-1.5cm，圓柱形或棒狀，白色，內(nèi)實變松軟至空心。孢子無色，有小疣，棱脊相連近網(wǎng)狀，近球形，（7-9）umx（6-7）um。褶側囊體緊梭形或具短尖，（45-65）umx（7-10）um。夏秋季于松林中地上群生，分布于云南等地。可食用。屬樹木外生菌根。

熱帶根瘤菌 拉丁屬名：Rhizobium tropici 用途：模式菌株 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

彎孢菌 用途：研究 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 屬名：Curvularia 種名加詞：sp.

三角孢小囊菌 拉丁屬名：Microascus trigonosporus 規(guī)格：斜面培養(yǎng)物 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

短芽孢桿菌屬 拉丁屬名：Brevibacillus sp. 用途：研究； 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究 具體用途： 特征特性：菌落直徑2.0mm，為圓形，扁平，邊緣整齊，表面有光澤，淡黃色，不透明，有黑色菌芯，在37℃生長    

狹窄刺革菌 拉丁屬名：Hymenochaete attenuata 注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

亞褐鈸孔菌NOS2/iNOS (Nitric Oxide Synthase 2, Inducible) ELISA Kit注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或，非藥用，非食用

三線鐮孢IL-2Rβ (Interleukin 2 Receptor Beta) ELISA Kit拉丁屬名: Fusarium tricinctum

阿姆斯特丹曲霉ERK3 (Extracellular Signal Regulated Kinase 3) ELISA Kit拉丁屬名: Aspergillus amsodami

RP4質粒CFP (Complement Factor P) ELISA Kit拉丁屬名: RP4
綿羊病毒2型探針法熒光定量PCR試劑盒供應商DHRS7B 英文名稱： 短鏈脫氫酶/還原酶家族7B 0.2ml

Anti-Arfaptin 2 ADP核糖基化因子結合蛋白2Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

CD209 英文名稱： 細胞間粘附分子非整合素蛋白3 0.1ml

醛縮酶A Anti-ALDA 0.1ml

Anti-MMP-2/RBITC 紅色羅丹明標記基質金屬蛋白酶-2IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FAK(Tyr576/577) 磷酸化粘著斑激酶 規(guī)格 0.1ml

Cx32(Connexin-32) 間隙連接蛋白32抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

C9orf72 英文名稱： 9號染色體開放閱讀框72 0.2ml

Anti-Integrin alpha 6/CD49f 整合素α6Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

PGF2 Alpha(Human Prostaglandin F2 Alpha) ELISA Kit 人素F2αMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-MARCKS (Ser152/156) 磷酸化丙氨酸蛋白激酶C底物MarcksMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh KGF/FGF7 纖維母細胞生長因子7 規(guī)格 0.1ml

Cox V-IgM(Human Coxsackie virus IgM) ELISA Kit 人柯薩奇病毒IgM 96T

PNMT 英文名稱： 胺甲基轉移酶 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-CDK6 (Tyr13) 磷酸化周期素依賴性激酶6 規(guī)格 0.1ml

人IgG 干粉 10mg/50mg/100mg 國產(chǎn)

WISP3 英文名稱： Wnt1信號通路蛋白3 0.2ml

DOCK4 英文名稱： 細胞質分裂付出蛋白4 0.2ml

Anti-Actinin alpha 4 α-輔肌動蛋白4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

EV71 polyprotein 3D 英文名稱： 腸道病毒71型/病毒 0.2ml

生精細胞凋亡相關基因4 Anti-TSARG4 0.2ml

CGNL1 英文名稱： 結蛋白樣蛋白CGNL1 0.1ml

Anti-HCN4 環(huán)化核苷酸調控陽離子通道蛋白亞型4Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

PCX(Human Podocalyxin) ELISA Kit 人足細胞標記蛋白/足盂蛋白Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-HER2 receptor HER2受體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Midkine 中期因子/肝素結合生長因子 規(guī)格 0.1ml

CDK-4(Human Cyclin-dependent kinase 4) ELISA Kit 人周期素依賴性激酶4 96T

RNF31 英文名稱： 環(huán)指蛋白31 0.2ml